β-半乳糖苷酶屬于糖苷水解酶,存在多種微生物來源,除了水解活性,某些來源的 β-半乳糖苷酶也具有轉(zhuǎn)糖基活性。β-半乳糖苷酶不僅在食品工業(yè)中的用途越來越廣泛,在生物技術(shù)領(lǐng)域如基因工程、酶工程、蛋白質(zhì)工程等方面也都發(fā)揮著重要作用,并開始廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥等領(lǐng)域。
實驗原理:
β-半乳糖苷酶染色試劑盒是一種基于衰老時衰老相關(guān)半乳糖甘酶活性水平上調(diào)而對衰老細(xì)胞或組織進(jìn)行染色檢測的試劑盒。在普通光學(xué)顯微鏡下就可以觀察到細(xì)胞或組織的衰老情況。細(xì)胞衰老被認(rèn)為是生物體抑制腫瘤的一種方式,同時也是生物體老化的一種潛在原因。
β-半乳糖苷酶染色試劑盒以X-Gal為底物,在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍(lán)色產(chǎn)物,光學(xué)顯微鏡下可觀察到變成藍(lán)色的表達(dá)β-半乳糖苷酶的細(xì)胞或組織。試劑盒僅染色衰老細(xì)胞,對正常培養(yǎng)的衰老前的細(xì)胞、靜止期細(xì)胞、永生細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞等不會染色。
注意事項:
1. β-Gal固定液有一定的腐蝕性和毒性,操作時請注意防護(hù)。
2. β-半乳糖苷酶染色反應(yīng)依賴于特定的pH條件,不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行染色反應(yīng)。較高濃度的二氧化碳會影響染色工作液的pH值,從而導(dǎo)致染色失敗。
3. 加入染色液后,可以用封板膜或者保鮮膜封住培養(yǎng)板防止蒸發(fā)。