細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征,指細(xì)胞在周期調(diào)控因子的作用下,通過DNA復(fù)制等反應(yīng),完成細(xì)胞分裂的過程。增殖檢測一般是分析分裂中細(xì)胞的數(shù)量變化,進(jìn)而反映細(xì)胞的生長狀態(tài)及活性,目前廣泛應(yīng)用于腫瘤生物學(xué),分子生物學(xué),藥代動力學(xué)等領(lǐng)域。
細(xì)胞增殖檢測的方法眾多,應(yīng)用非常廣泛,按檢測原理主要分為4 類:檢測DNA合成、檢測代謝活性、檢測細(xì)胞增殖相關(guān)抗原和檢測ATP濃度。其中,細(xì)胞DNA合成檢測是通過測定細(xì)胞的DNA合成量來評價細(xì)胞的增殖能力,直接測定DNA合成是檢測細(xì)胞增殖最準(zhǔn)確的方法,它是測定物質(zhì)毒性、評估藥物安全評價、判斷細(xì)胞健康、細(xì)胞增殖等研究方向常用方法之一,常用的檢測試劑主要是EdU、BrdU等。
實驗原理
EdU(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine)與BrdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物,它們能夠在細(xì)胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復(fù)制的DNA分子,然后分別利用免疫熒光技術(shù)、與Apollo熒光染料特異性反應(yīng)檢測細(xì)胞增殖情況。
傳統(tǒng)的BrdU有一大缺點,就是需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合,但這就破壞了DNA雙鏈結(jié)構(gòu),影響了其他染料的結(jié)合染色,導(dǎo)致染色彌散,準(zhǔn)確性降低等問題。而EdU檢測法更簡單、更快速、更準(zhǔn)確,不需要嚴(yán)苛的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理,有效地避免了樣品損傷,有助于在組織、器官的整體水平上觀測細(xì)胞增殖的真實情況,具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。這是一種新型的非放射性同位素細(xì)胞增殖檢測的方法,在細(xì)胞培養(yǎng)、實體組織及臨床研究中得到了廣泛的應(yīng)用。該技術(shù)可用于細(xì)胞成像、流式、細(xì)胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測、線粒體活性檢測以及病毒增殖活性檢測等。