樹脂包埋（透射電鏡）

樹脂包埋（透射電鏡）

樹脂包埋實(shí)驗(yàn)步驟：

1、取材：電鏡取材非常嚴(yán)格，取材過程中速度要快，5分鐘內(nèi)要將組織取出放入固定液中；取材組織塊要小，一般要求將組織切成1立方毫米大??；取材部位要準(zhǔn)確、取材溫度要低是在4℃條件下進(jìn)行；取材工具要干凈，鋒利。如果是貼壁細(xì)胞不可用酶消化下來，先吸去培養(yǎng)液然后加入電鏡固定液用橡膠塊刮下細(xì)胞，離心，細(xì)胞體積保證綠豆大小即可，然后吸去上清更換固定液繼續(xù)固定。

2、固定：取材后要及時固定，組織、細(xì)胞、蛋白等固定選用2.5%中性戊二醛固定液，植物等標(biāo)本則需要選用多聚甲醛和戊二醛的混合固定液。室溫固定兩小時左右后，放入4℃保存運(yùn)輸（如果是植物或者肺組織，則需要進(jìn)行真空抽氣固定，一般需要抽氣固定24小時左右，直至標(biāo)本*沉入容器底部）。

3、鋨酸后固定：將標(biāo)本從固定液中取出，用0.1mol/L的PB清洗并過夜，第二天轉(zhuǎn)入1%鋨酸后固定，固定時間普通標(biāo)本2h左右，植物標(biāo)本8至12h左右。

4、脫水：鋨酸固定后的標(biāo)本用用0.1mol/L的PB清洗后使用梯度乙醇脫水，濃度依次是50%、70%、80%、90%、95%、100%，植物標(biāo)本則會在50%乙醇前面再增加一個30%乙醇梯度，脫水時間普通標(biāo)本為10~15min，植物標(biāo)本脫水時間為1~1.5h4、浸透：用丙酮作為乙醇和樹脂間的過度溶劑，從純丙酮開始，中間經(jīng)過丙酮和樹脂的混合劑，混合比例丙酮從高到低到純樹脂，整個浸透過程需要1~2天完成。

5、包埋：先將組織對應(yīng)的標(biāo)簽放包埋板中，然后加入樹脂，再將浸透好的樣本放入包埋板中，調(diào)整好包埋面，然后放入恒溫箱內(nèi)熟化，熟化過程需要2~3天。熟化完成后，樣本樹脂包埋完成。

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