甲苯胺藍(lán)染色法是一種常用的蛋白質(zhì)染色方法,它可以用于檢測蛋白質(zhì)的存在和定量。該方法基于蛋白質(zhì)與甲苯胺藍(lán)(CoomassieBrilliant Blue)染料的相互作用,通過染色反應(yīng)來檢測蛋白質(zhì)。
甲苯胺藍(lán)是一種有機(jī)染料,它具有強(qiáng)烈的吸附性和親和性,可以與蛋白質(zhì)中的氨基酸殘基(主要是賴氨酸、精氨酸和組氨酸)發(fā)生靜電作用和氫鍵作用,形成染色復(fù)合物。這種染色復(fù)合物可以在紫外線下發(fā)出藍(lán)色熒光,從而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的檢測和定量。
甲苯胺藍(lán)染色法具有靈敏度高、操作簡便、成本低廉等優(yōu)點(diǎn),因此被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。但是,該方法也存在一些局限性,如染色效果受蛋白質(zhì)種類和含量的影響,染色后的蛋白質(zhì)不能再次利用等。因此,在實(shí)際應(yīng)用中需要根據(jù)具體情況選擇合適的染色方法。
實(shí)驗(yàn)流程:
2、切片浸入甲苯胺藍(lán)溶液1-5min(軟骨和肥大細(xì)胞著色較快,染1min軟骨和肥大細(xì)胞即呈鮮艷的紫紅色,其他成分和細(xì)胞著淺藍(lán)色;尼氏體著色較慢需染3-5min,神經(jīng)元內(nèi)的尼氏體著深藍(lán)色,背景幾乎無色。如著色不夠可稍微延長染色時間。)
3、水洗洗去多余染料(藍(lán)色在水里的時間過長也會稍許褪色)
4、脫水:無水乙醇I 2-5min-無水乙醇II 2-5min-無水乙醇III 2-5min-正丁醇2min-二甲苯透明數(shù)分鐘濕封。
結(jié)果判讀:
注意事項(xiàng):
1、染完色的片子不要烤干后二甲苯透明封片,否則片子上極易出現(xiàn)水珠;
2、脫水的酒精最好用干凈的無水乙醇含水量不能太高否則易脫色;
3、染色時可稍過染,因?yàn)樵诿撍倪^程中藍(lán)色或紫紅色會緩慢褪色,如果背景過深可稍微延長脫水時間至肉眼看組織為極淺藍(lán)色或近乎無色。但脫水時間也不能太長否則顏色會全部脫色,并且肥大細(xì)胞的紫紅色會變成藍(lán)色。